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高效液相色谱仪出厂检验的操作规程
发布时间:2019-10-08 09:46   点击次数:
高效液相色谱仪出厂检验的操作规程




高效液相色谱仪出厂时,必须经过严格的检验,保证质量合格才能出厂。具体方法如下:
 
一、外观检查
a) 外观整洁,外表应光洁平整、字迹清晰,表面涂覆色泽均匀、不应有明显划伤、露底、裂纹、起泡等现象。
 
b) 仪器上应有仪器的名称、型号、制造厂名、产品系列号、出厂日期等内容的标牌。出厂的仪器还应有制造计量器具许可证标志。
 
c)仪器的电源线、信号线等插接紧密,各调节旋钮、按键、开关等工作正常,无松动;指示灯、显示器清晰完整。
 
d)整机显示屏指示灯,屏幕亮度一致
 
e)初始参数设置正确
 
输液泵参数设置:流速:1.0mL/min;最大压力:6000psi;最小压力:0psi;System:地址:2或3;控制模式:0:remote(等度配N2000可设为1:local)其他参数默认。
 
检测器参数设置:波长:254nm;链接模式:0;控制模式:0:remote(等度配N2000可设为1:local);地址:1。
 
二、高效液相色谱仪输液泵
2.1 输液泵恒压测试
 
2.1.1 要求
 
输液泵连接恒压测试色谱柱,压力恒定在4000psi左右3小时,无漏液。
 
2.1.2 设备及试剂
 
包括:
 
a) 耐压测试色谱柱一根;
 
b) 秒表一块:分度值不大于 0.1s;
 
c) 耐压测试流动相:20%甲醇水溶液。
 
2.1.3 试验程序
 
将输液泵通过管路连接色谱柱,调节合适流量(0.1~5ml/min),使压力在4000psi左右,测试过程中观察有无无漏液情况。
 
2.2 密封性
 
2.2.1 要求:
 
输液泵流路截止,压力达到上限值的 90%(5400psi),输液泵停止运行,保持 10min,压力下降应不大于 5MPa(约 710psi),并且无漏液。
 
2.2.2 设备及试剂
 
包括:
 
a) 堵头一个;
 
b) 秒表一块:分度值不大于 0.1s;
 
c) 纯净水
 
2.2.3 试验程序
 
将输液泵通过三通,输液泵最高压力设定在压力上限值90%处,以纯净水为流动相,待系统排出气体,流量设为0.1mL/min,启动输液泵,用堵头堵住泵出口处,压力将逐渐上升,达到输液泵压力上限值90%时,输液泵停止运行,记录此时压力表示值,保持10min后,记录压力表示值。测试过程中观察有无无漏液情况。
 
按公式(1)计算压力下降值:
 
 
 ........................................................(1)
 
式中:
 
△p —— 压力下降值,单位为兆帕(MPa);
 
p 1 —— 达到上限值90%时的压力表示值,单位为兆帕(MPa);
 
p 2 —— 停泵10min后压力表示值,单位为兆帕(MPa)。
 
2.3 流量输出误差及稳定性
 
2.3.1 要求:
 
泵流量输出误差及稳定性见表1:
 
2.3.2 设备及试剂
 
包括:
 
a) 秒表一块:分度值不大于 0.1s;
 
b) 分析天平一台:根据测试流量大小选择合适载荷,测试质量尽量在天平载荷的 60%左右,准确度不低于 级,实际标尺分度值不大于 1mg;
 
c) 背压装置一个:在设定流量下可提供适当的背压;
 
d) 25mL 的容量瓶三个;
 
e) 纯净水。
 
2.3.3 试验程序
 
用仪器专用管路连接输液泵的出口、入口,出口适当加一背压,以纯净水为流动相,将数字温度计探针插入流动相内,测量此时流动相的试验温度。设定合适流量,待输液泵运行稳定后,按表 1 分别设定流量,在流动相排出口用事先清洗并称重过的称量瓶收集流动相,同时用秒表计时,待达到表 2 规定的收集时间后停止收集流动相,并按下秒表停止计时。每个流量下各测试三次。分别按公式(2)、公式(3)计算流量输出误差及稳定性。
 
 ...............................................................(2)
 
...............................................................(3)
 
式中:
 
S S ——流量输出误差%;
 
S R ——流量稳定性%;
 
F m —— F m =( W 2 - W 1 )/(ρ∙t),流量实测值,单位为毫升每分钟(mL/min);
 
W 1 ——称量瓶重量,单位为克(g);
 
W 2 ——称量瓶+流动相重量,单位为克(g);
 
ρ ——试验温度下流动相的密度,单位为克每毫升(g/mL);
 
t ——收集流动相的时间,单位为分钟(min);
 
m F ——同一设定流量三次测量的平均值,单位为毫升每分钟(mL/min);
 
F S ——流量设定值,单位为毫升每分钟(mL/min);
 
F max ——同一设定流量三次测量的最大值,单位为毫升每分钟(mL/min);
 
F min ——同一设定流量三次测量的最小值,单位为毫升每分钟(mL/min)。
 
注:注:流量的设定可根据输液泵的流量范围而定。流量测量顺序可以任意选择。
 
表 2 泵流量试验收集时间要求
 
2.4 梯度误差
 
2.4.1 要求:
 
梯度误差不超过 ±2%
 
2.4.2 设备及试剂:
 
包括:
 
a) 紫外检测器一台;
 
b) 色谱数据工作站
 
c) 背压装置一个:在设定流量下可提供 8MPa ±2 MPa 的背压;
 
d) 两通一个;
 
e) 流动相:A 通道溶液:二次蒸馏水;B 通道溶液:0.1%丙酮/水溶液.
 
2.4.3 试验程序
 
将紫外检测器波长设定在 254nm.泵出口适当加一背压(8MPa ± 2MPa)并通过两通连接到检测器.色谱数据工作站(或记录仪)与检测器信号输出端连接,按表 3 设置梯度参数,梯度设置示意图见图 1.输液泵流量设为 1.0mL/min,待仪器稳定后,开始采集数据,得到梯度曲线.测量各种溶液配比时的输出信号值,用式(4)计算各种溶液配比时的梯度误差,重复两次,取其中最大者为输液泵梯度误差,梯度误差计算示意图见图 2.
 
梯度误差的计算
 
式中:
 
T ci 第 i 段梯度误差%,i=1,2,3,4;
 
L ti 第 i 段设定梯度值%,i=1,2,3,4;
 
V A A 通道流动相 100%时输出信号值;
 
V B B 通道流动相 100%时输出信号值;
 
V i 第 i 段梯度输出信号值,i=1,2,3,4.
 
2.5 压力显示
 
2.5.1 要求:
 
输液泵压力显示与精密压力表差值小于 ± 0.5MPa
 
2.5.2 设备及试剂:
 
包括:
 
a) 需经过较准精密压力表一台
 
b) 堵头一个;
 
c) 二通一个;
 
d) 流动相:A 二次蒸馏水;
 
e) 管路;
 
2.5.2 试验程序
 
开启输液泵,查看压力显示是否为 0,若为不 0,将压力调为 0,将输液泵出口管路与二通一接口相接,精密压力表与二通另一接口相接,开启泵,以 5mL/min 流量运行,直至压力表读书开始上升至1MPa 左右(压力表管路体积较大),将流速调成 0.1mL/min,升至 5MPa 时调节压力微调装置,使压力显示与精密压力表一致。
 
2.6 清洗装置测试
 
2.6.1 要求
 
清洗溶液能顺畅流出
 
2.6.2 测试程序
 
将清洗装置管路连接好,进液管放在清洗溶液中,注射器连接到出口管,将空气抽净,液体顺畅流出,泵头四周无液体渗出,
 
三、高效液相色谱仪检测器
3.1. 波长示值误差
 
3.1.1 要求
 
波长示值误差应不超过 ±2nm。
 
3.1.2 设备及试剂
 
包括:
 
a) 色谱数据工作站
 
b) 二通一个;
 
c) 5mL 注射器一支;
 
d) 标物:紫外波长标准溶液(标准波长为 235nm、257nm、313nm、350nm)
 
e) 标物:紫外波长标准溶液空白液:0.05mol/L 硫酸溶液
 
3.1.3 试验程序
 
将检测器和电脑相连,开机预热稳定后,在每设定波长处用1mL注射器向与检测池相连的二通的入口处注入紫外波长标准溶液(充满检测池),打开软件波长扫描程序,直接扫描紫外波长标准溶液光谱图(注意扣除空白),谱峰最高或最低时的波长值与标准溶液特征波长之差即为波长示值误差。
 
3.2 波长重复性
 
3.2.1 要求
 
波长重复性应不大于1nm。
 
3.2.2 设备及试剂
 
f) 色谱数据工作站一台
 
g) 输液泵一台
 
h) 二通一个;
 
i) 5mL 注射器一支;
 
j) 标物:紫外波长标准溶液(标准波长为 235nm、257nm、313nm、350nm)
 
k) 标物:紫外波长标准溶液空白液:0.05mol/L 硫酸溶液
 
3.2.3 试验程序
 
利用色谱数据工作站波长扫描功能,直接扫描紫外波长标准溶液光谱图,连续扫描三次,选取对应波长三次中最大值与最小值之差为波长重复性误差。
 
3.3 静态基线漂移及静态短期基线噪声
 
3.3.1 要求
 
静态基线漂移应不大于 5×10-4 AU/h;
 
静态短期基线噪声应不大于 3×10-5 AU。
 
3.3.2 设备
 
色谱数据工作站一台
 
3.3.3 试验程序
 
检测器波长为254nm,检测器为空池(充满空气),响应时间(T 90 ) 不大于1.0s。开机预热后,记录基线1h,取1h内平行包络线的中心线的起点与终点的差值为检测器基线漂移。选取所记录基线中噪声较大的5min作为计算噪声的基线,以为1min为界画平行包络线,按照下列公式计算短期基线噪声。五个平行包络线宽度的平均值,作为检测器短期基线噪声。
 
3.4 动态基线漂移及动态短期基线噪声
 
3.4.1 要求
 
静态基线漂移应不大于 1×10-3 AU/h;
 
静态短期基线噪声应不大于 5×10-5 AU。
 
3.4.2 设备及试剂
 
包括:
 
a) 输液泵一台;
 
b) 色谱数据工作站
 
c) 背压装置一个:在设定流量下可提供 8MPa ±2 MPa 的背压;(可用色谱柱替代)
 
d) 两通一个;
 
e) 流动相:甲醇
 
3.4.3 试验程序
 
将输液泵与检测器及色谱数据工作站连接,泵出口适当加一背压(8MPa ±2 MPa),并连接到检测器,以 100%甲醇为流动相,流量设定为 1.0ml/min,其他同静态基线漂移及静态短期基线噪声。
 
3.5 最小检测浓度
 
3.5.1 要求
 
最小检测浓度应不大于4×10-8 g/ml。
 
3.5.2 设备及试剂
 
包括:
 
a) 输液泵一台;
 
b) 色谱数据工作站
 
c) 带定量环(10μL 或 20μL)进样阀一个;
 
d) 50μL 注射器一支
 
e) C18 色谱柱一支:4.6mm´250mm,5μm,理论塔板数不小于 50000N/m;
 
f) 标物:1.0×10-7 g/mL 萘/甲醇标准溶液;
 
g) 流动相:HPLC 级甲醇 100%。
 
3.5.3 试验程序
 
连接仪器系统(包括泵、检测器、色谱数据工作站、色谱柱、进样阀等配件),检测器波长设定为 254nm,检测器灵敏度设定为 1.0AU , 泵流量设定为 1.0mL/min,运行系统,待检测器示值稳定后从进样阀入口注入 1.0×10-7 g/mL 的萘/甲醇溶液 20μL,采集色谱图,记录色谱图中萘-甲醇溶液的峰高和短期基线噪声。按公式(4)计算最小检测浓度:
 
...................................................................(4)
 
式中:
 
C L ——最小检测浓度,单位为克每毫升(g/mL);
 
H d ——短期基线噪声,单位为 mAU;
 
c ——标准溶液浓度,单位为克每毫升(g/mL);
 
H ——标准溶液的色谱峰高,单位为 mAU;
 
V ——进样体积,单位为微升(μL)。
 
注: 式中的数字“20”为标准的进样体积,单位为微升(µL)。
 
3.6 线性范围试验
 
3.6.1 要求
 
线性范围应不小于 104 。
 
3.6.2 设备及试剂
 
该项目试验用主要设备及试剂应包括以下方面:
 
a) 试样:甲溶液:2%异丙醇水溶液,乙溶液:丙酮/2%异丙醇系列水溶液(丙酮浓度依次为 0.1%、0.2%、0.3%……,1%)。
 
b) 输液泵两台;A 泵以 2%异丙醇水溶液为流动相,丙酮/2%异丙醇系列水溶液为流动相
 
3.6.3 试验程序
 
将检测器和电脑连接好,检测器波长设定在254nm。开机预热后,A泵的滤头用甲溶液冲洗三遍后放入甲溶液中,设定流速为1mL/min,将输液系统排气后直接运行,冲洗检测池至示值稳定后将检测器基线调至零。向检测池内依次注入乙溶液,充满检测池并使示值稳定,记录各浓度下的响应信号值。以前五个丙酮含量(0.1%~0.5%五个点)和对应响应信号值作标准曲线,在曲线上找出丙酮含量大于0.5%的各点计算值,与对应含量的测量值比较,测量值大于计算值5%时,认为曲线弯曲,此点浓度作为线性上限C H ,按照4.4.1.4最小检测浓度试验方法测出丙酮C L 值,由C H /C L 算出检测器线性范围。
 
注:每次切换不同浓度的乙溶液时都应用甲溶液先冲洗检测池至基线回零。
 
四、高效液相色谱仪整机性能
4.1 定性、定量测量重复性试验
 
4.1.1 要求
 
定性测量重复性应不大于0.5%;
 
定量测量重复性应不大于3.0%;
 
4.1.2 设备及试剂
 
包括:
 
h) 色谱数据工作站
 
i) 带定量环(10μL 或 20μL)进样阀一个;
 
j) 50μL 注射器一支
 
k) C18 色谱柱一支:4.6mm´250mm,5μm,理论塔板数不小于 50000N/m;
 
l) 标物:1.0×10-7 g/mL 萘/甲醇标准溶液;
 
m) 流动相:HPLC 级甲醇 100%。
 
a) 50μL 注射器一支;
 
b) C18 色谱柱一支:4.6mm´250mm ,5μm,理论塔板数应≥10000N/m;
 
c) 标物:1.0×10-4 g/mL 萘/甲醇标准溶液;
 
d) 流动相:HPLC 级甲醇(经 0.45μm 微孔滤膜抽滤),纯水
 
4.1.3 试验程序
 
a.等度系统试验程序
 
将仪器(包括泵、检测器、色谱数据工作站、色谱柱及进样阀等配件)连接好,根据仪器配置的检测器选择流动相和测量参数。紫外-可见光检测器用 HPLC 级甲醇为流动相,流量为1.0mL/min,检测波长为 254nm,基线稳定后注入 1.0×10-4 g/mL 萘/甲醇标准溶液 20μL,记录保留时间和峰面积(或峰高),连续 7 次;
 
b.梯度系统试验程序
 
将仪器(包括泵、检测器、色谱数据工作站、色谱柱及进样阀混合器等配件)连接好,根据仪器配置的检测器选择流动相和测量参数。按照下列梯度程序测试,检测波长为 254nm,基线稳定后注入 1.0×10-4 g/mL 萘/甲醇标准溶液 20μL,记录保留时间和峰面积(或峰高),连续 7 次;
 
将保留时间测试数据代入公式(5)计算定性重复性 RSD 值,将峰面积(或峰高)测试
 
数据代入公式(5)计算定量重复性误差 RSD 值。
 
...................................................(5)
 
式中:
 
iX——第 i 次测得的保留时间或峰面积(或峰高);
 
X ——n 次测量结果的算术平均值;
 
i ——测量次数序号;
 
n ——测量总次数(此处 n=7)。
 
4.2 控制系统测试
 
4.2.1 要求
 
色谱软件能正常反控仪器,输液泵的启动与停止测试,检测器的波长更改及信号归零,触发信号的通讯正常。
 
4.2.2 测试程序
 
将仪器(包括泵、检测器、系统控制器、色谱数据工作站、色谱柱及进样阀混合器等配件)连接好,利用软件反控仪器,检查通讯是否正常。输液泵泵的启动与停止测试,检测器的波长更改及信号归零,触发信号的通讯检验。
 
4.3 梯度配置中混合器密封性测试
 
4.3.1 要求
 
将混合器连接在两台输液泵流路出口处,压力达到上限值的 90%(5400psi),输液泵停止运行,保持 10min,整体压力下降应不大于 5MPa(约 710psi)。
 
4.3.2 设备及试剂
 
包括:
 
a) 堵头一个;
 
b) 秒表一块:分度值不大于 0.1s;
 
c) 纯净水
 
4.3.2 测试程序
 
将两台输液泵与混合器相连,输液泵最高压力设定在压力上限值 90%处,以纯净水为流动相,待系统排出气体,流量设为 0.1mL/min,启动输液泵,用堵头堵住混合器出口处,压力将逐渐上升,达到输液泵压力上限值 90%时,输液泵停止运行,记录此时压力表示值,保持 10min 后,记录压力表示值。
 
按公式(1)计算压力下降值:
 
........................................................(1)
 
式中:
 
△p —— 压力下降值,单位为兆帕(MPa);
 
p 1 —— 达到上限值90%时的压力表示值,单位为兆帕(MPa);
 
p 2 —— 停泵10min后压力表示值,单位为兆帕(MPa)。
 
4.4 反压阀压力调节测试
 
4.4.1 要求
 
反压阀压力调节范围0~5Mpa,正常连接时压力调节口无漏液。
 
4.4.2 设备及试剂
 
a) 纯净水
 
4.4.2 测试程序
 
将输液泵与反压阀相连,以纯净水为流动相,流速 1.0ml/min,待流速稳定后,调节反压阀调压旋钮,使压力能正常增加 5Mpa 左右,观察有无漏液情况。
 
五、高效液相色谱仪的安全
5.1 绝缘电阻
 
5.1.1 要求
 
仪器在正常工作条件下,绝缘电阻应大于20MΩ
 
5.1.2 设备
 
绝缘电阻测试仪
 
5.1.3 试验程序
 
仪器在不工作状态下,电源开关置于接通位置,用绝缘电阻表在电源插头的相、中连线和机壳(零线)之间施加500V直流试验电压,稳定5s后测量绝缘电阻。
 
5.2 绝缘强度
 
5.2.1 要求
 
仪器在正常工作条件下,应能承受1500V交流有效值连续1min的电压试验,不应出现飞弧或击穿现象。
 
5.2.2 设备
 
耐电压测试仪。耐电压测试仪产生的试验电压为正弦波形,其失真系数不大于5%,频率为50Hz±2.5Hz。
 
5.2.3 试验程序
 
仪器在不工作状态下,电源开关置于接通位置,将耐电压测试仪的击穿电流置于5mA档,在电源插头的相、中连线和机壳(零线)之间施加试验电压,试验电压应在5s~10s内从0逐渐上升到1500V,保持1min,然后在5s~10s内平稳下降到零。
 
5.3 泄漏电流
 
5.3.1 要求
 
仪器在正常工作条件下,泄漏电流应不大于5mA。
 
5.3.2 设备
 
泄漏电流测量仪。
 
5.3.3 试验程序
 
仪器置于绝缘的工作台上,其电源插头与泄漏电流测量仪输出端相连,泄漏电流测试仪接入电网并通电,仪器电源开关置于接通位置,将电压调至242V,记录电流值;变换仪器电源极性,重复测量一次,记录电流值。取两次中的电流最大值为仪器泄漏电流。
 
六、高效液相色谱仪的包装
6.1 标志
 
6.1.1 产品标志
 
每台产品应在明显的部位固定产品铭牌,铭牌标志上应明确标示下列内容:
 
a) 制造厂名称;
 
b) 仪器型号;
 
c) 仪器名称;
 
d) 商标;
 
e) 制造日期、仪器编号;
 
f) 制造计量器具许可证标识和编号。
 
6.1.2 包装标志
 
产品的包装标志规定如下:
 
a) 制造厂名称和地址;
 
b) 仪器名称;
 
c) 商标
 
d) 制造计量器具许可证标识和编号;
 
e)仪器质量,单位 kg;体积:长×宽×高,单位 mm×mm×mm;
 
f)包装储运图示标志:“易碎物品”、“怕雨”、“向上”等应符合 GB/T 191 的规定;
 
g)发货收货单位名称和地址。
 
6.2 包装
 
6.2.1 产品包装
 
产品的包装应符合GB/T 13384-2008中的5.6.2和5.6.5的防潮、缓冲包装规定。
 
6.2.2 随机文件
 
产品的随机文件有以下方面:
 
a) 装箱单;
 
b) 保修单;
 
c) 使用说明书;
 
d) 出厂合格证书;
 
e) 根据仪器技术条件规定的其他文件。

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